Protocolos de histología rápida de semillas: Libre de derivados de benceno vs dependiente del xilol

Introducción. Las semillas son estructuras complejas que permiten la propagación biológica y agrícola de plantas. La histología de semillas puede ser utilizada para enseñanza, investigación y para diagnóstico patológico. Los protocolos de histología están divididos en cinco etapas: fijación...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autores principales:	Benavides-Acevedo, M., Torres-Segura, J.
Formato:	Online
Idioma:	eng spa
Publicado:	Universidad de Costa Rica 2022
Acceso en línea:	https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/agromeso/article/view/51308

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description	Introducción. Las semillas son estructuras complejas que permiten la propagación biológica y agrícola de plantas. La histología de semillas puede ser utilizada para enseñanza, investigación y para diagnóstico patológico. Los protocolos de histología están divididos en cinco etapas: fijación, procesamiento, corte, tinción y montaje. El xilol es un reactivo peligroso que se usa durante el procesamiento, tinción y montaje de muestras histológicas que puede contaminar el ambiente y es tóxico para los usuarios. Objetivo. Comparar dos protocolos nuevos de histología de semillas acelerados con microondas, en semillas de especies de importancia económica. Materiales y métodos. Los experimentos fueron realizados entre enero y mayo del 2022 en el Centro para Investigaciones en Granos y Semillas de la Universidad de Costa Rica. Los protocolos comparados fueron: uno libre de derivados de benceno (BDF) y uno dependiente de xilol (XD). Se usaron semillas de Carica papaya L. (Caricaceae) var. Pococí, Coffea arabica L. (Rubiaceae) var. Obata, Glycine max L. (Fabaceae) var. CIGRAS-06, Phaseolus vulgaris L. (Fabaceae) var. Tayni, Oryza sativa L. (Poaceae) var. Lazarroz FL, and Zea mays L. (Poaceae) var. EJN-2. Tres réplicas técnicas de cinco semillas de cada una de las especies se procesaron con los protocolos BDF y XD, cada réplica en días distintos. Resultados. Las fotomicrografías obtenidas con ambos protocolos mostraron que las muestras mantuvieron la integridad morfológica del embrión, del endospermo o de los cotiledones y de otras estructuras de la semilla. Los protocolos BDF y XD generaron láminas de histología y fotomicrografías. La tinción PAS- azul de Coomassie hizo una buena diferenciación de los carbohidratos y proteínas. La rapidez de ambos protocolos es un beneficio comparado con otros protocolos de histología vegetal que pueden durar varios días o incluso semanas. Conclusiones. Los protocolos BDF y XD fueron adecuados para el análisis histológico de semillas de frijol, café, maíz, papaya y soya en menos de 5 horas. El protocolo BDF es el primero de procesamiento de tejidos vegetales que no usa derivados de benceno e incorpora parafina como medio de inclusión.
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Xylene is a dangerous reagent used during the processing, staining, and mounting of histological specimens that can contaminate the environment and is toxic for users. Objective. To compare two new protocols for seed histology accelerated with microwave, tested on seeds of economic importance species. Materials and methods. The experiments were done between January and May of 2022 at the Centro de Investigaciones en Granos y Semillas (CIGRAS) of the Universidad de Costa Rica. The compared protocols were: a benzene derivatives-free (BDF) and a xylene-dependent (XD). Seeds of Carica papaya L. (Caricaceae) var. Pococí, Coffea arabica L. (Rubiaceae) var. Obata, Glycine max L. (Fabaceae) var. CIGRAS-06, Phaseolus vulgaris L. (Fabaceae) var. Tayni, Oryza sativa L. (Poaceae) var. Lazarroz FL, and Zea mays L. (Poaceae) var. EJN-2 were used. Three technical replicates of five seeds of each species were tested with the XD and BDF protocols, on different days each replicate. Results. The photomicrographs obtained with both protocols showed that the samples maintained the morphology integrity of embryo, endosperm or cotyledons, and other seed structures. BDF and XD protocols produced seed histology slides and microphotographs. PAS-Coomassie Blue staining made a good differentiation of carbohydrates and proteins. Fastness of both protocols is a benefit compared with other protocols for plant histology that can take several days or even weeks. Conclusions. The BDF and XD protocols were suitable for seed histology analysis of bean, coffee, maize, papaya, and soybean, slides were obtained in less than 5 hours. BDF protocol is the first for plant tissue processing that does not use benzene derivatives and that uses paraffin as embedding medium. Introducción. Las semillas son estructuras complejas que permiten la propagación biológica y agrícola de plantas. La histología de semillas puede ser utilizada para enseñanza, investigación y para diagnóstico patológico. Los protocolos de histología están divididos en cinco etapas: fijación, procesamiento, corte, tinción y montaje. El xilol es un reactivo peligroso que se usa durante el procesamiento, tinción y montaje de muestras histológicas que puede contaminar el ambiente y es tóxico para los usuarios. Objetivo. Comparar dos protocolos nuevos de histología de semillas acelerados con microondas, en semillas de especies de importancia económica. Materiales y métodos. Los experimentos fueron realizados entre enero y mayo del 2022 en el Centro para Investigaciones en Granos y Semillas de la Universidad de Costa Rica. Los protocolos comparados fueron: uno libre de derivados de benceno (BDF) y uno dependiente de xilol (XD). Se usaron semillas de Carica papaya L. (Caricaceae) var. Pococí, Coffea arabica L. (Rubiaceae) var. Obata, Glycine max L. (Fabaceae) var. CIGRAS-06, Phaseolus vulgaris L. (Fabaceae) var. Tayni, Oryza sativa L. (Poaceae) var. Lazarroz FL, and Zea mays L. (Poaceae) var. EJN-2. Tres réplicas técnicas de cinco semillas de cada una de las especies se procesaron con los protocolos BDF y XD, cada réplica en días distintos. Resultados. Las fotomicrografías obtenidas con ambos protocolos mostraron que las muestras mantuvieron la integridad morfológica del embrión, del endospermo o de los cotiledones y de otras estructuras de la semilla. Los protocolos BDF y XD generaron láminas de histología y fotomicrografías. La tinción PAS- azul de Coomassie hizo una buena diferenciación de los carbohidratos y proteínas. La rapidez de ambos protocolos es un beneficio comparado con otros protocolos de histología vegetal que pueden durar varios días o incluso semanas. Conclusiones. Los protocolos BDF y XD fueron adecuados para el análisis histológico de semillas de frijol, café, maíz, papaya y soya en menos de 5 horas. El protocolo BDF es el primero de procesamiento de tejidos vegetales que no usa derivados de benceno e incorpora parafina como medio de inclusión. Universidad de Costa Rica 2022-10-05 info:eu-repo/semantics/article info:eu-repo/semantics/publishedVersion Article text text/xml application/pdf application/epub+zip text/html audio/mpeg audio/mpeg https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/agromeso/article/view/51308 10.15517/am.v33iEspecial.51308 Agronomía Mesoamericana; 2022: Agronomía Mesoamericana: Vol. 33, Special Issue (September-December) ; 51308 Agronomía Mesoamericana; 2022: Agronomía Mesoamericana: Vol. 33, Nº Especial (setiembre-diciembre) ; 51308 Agronomía Mesoamericana; 2022: Agronomía Mesoamericana: Vol. 33, Special Issue (September-December) ; 51308 2215-3608 1021-7444 eng spa https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/agromeso/article/view/51308/52974 https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/agromeso/article/view/51308/52975 https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/agromeso/article/view/51308/52976 https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/agromeso/article/view/51308/52977 https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/agromeso/article/view/51308/52978 https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/agromeso/article/view/51308/52979 Copyright (c) 2022 M. Benavides-Acevedo, J. Torres-Segura

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