Expression of the rice hoja blanca virus (RHBV) non-structural protein 3 (NS3) in Escherichia coli and its in situ localization in RHBV-infected rice tissues
El gen que codifica por la proteína no estructural NS3 del virus de la hoja blanca de arroz (RHBV) se fusionó al extremo carboxilo del gen de la glutationa-S-transferasa y se expresó en la cepa JM83 de Escherichia coli. Se obtuvieron altas concentraciones de la proteína de fusion (GST-NS3) en forma...
Autores principales: | , , , |
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Formato: | Online |
Idioma: | eng |
Publicado: |
Universidad de Costa Rica
2004
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Acceso en línea: | https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/rbt/article/view/15413 |
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RBT154132022-05-30T17:30:27Z Expression of the rice hoja blanca virus (RHBV) non-structural protein 3 (NS3) in Escherichia coli and its in situ localization in RHBV-infected rice tissues Expression of the rice hoja blanca virus (RHBV) non-structural protein 3 (NS3) in Escherichia coli and its in situ localization in RHBV-infected rice tissues Muñoz, Miguel Bolaños, Isela Arrieta-Espinoza, Griselda Espinoza, Ana M rice hoja blanca virus RHBV NS3 polyclonal antibodies immunoelectron microscopy virus hoja blanca arroz RHBV NS3 anticuerpos policlonales inmunoelectro microscopia The non-structural NS3 protein gene from the rice hoja blanca virus (RHBV) was fused to the glutathione- S-transferase carboxilic end and expressed in Escherichia coli strain JM83. Large quantities of fusion protein were produced in insoluble form. The fusion protein was fractionated in SDS-PAGE and purified by electroelution, polyclonal antibodies were raised in rabbit and the antiserum was absorbed with bacterial crude extract. A band of similar size as that of NS3 protein was observed in Western blots using extracts from RHBVinfected rice plants. Immunoelectron microscopy with colloidal gold-labeled antibodies against NS3 protein and the viral nucleocapsid protein revealed in situ accumulation of NS3 protein in the cytoplasm but not in the viral inclusion bodies, vacuoles or chloroplasts of RHBV-infected plants, following the same pattern of distribution as the RHBV nucleocapsid protein. El gen que codifica por la proteína no estructural NS3 del virus de la hoja blanca de arroz (RHBV) se fusionó al extremo carboxilo del gen de la glutationa-S-transferasa y se expresó en la cepa JM83 de Escherichia coli. Se obtuvieron altas concentraciones de la proteína de fusion (GST-NS3) en forma insoluble. La proteína de fusión se fraccionó en geles de SDS-PAGE, se purificó por electroelución, y se utilizó para producir anticuerpos policlonales en conejo . El antisuero producido se absorbió con extractos crudos de E. coli. Extractos crudos de plantas de arroz sanas e infectadas con el RHBV se evaluaron por Western blots detectándose una banda de peso molecular similar al estimado para la proteína NS3 (23KDa) en las plantas infectadas con el virus. Los tejidos provenientes de plantas infectadas con el RHBV se analizaron por medio de microscopia inmunoelectrónica con oro colloidal marcado con anticuerpos contra la proteína NS3 y la nucleoproteína viral N. Se observó una acumulación in situ de la proteína NS3 en el citoplasma, pero no se detectó en los cuerpos de inclusion, vacuolas o cloroplastos. Se demostró que la proteína NS3 sigue el mismo patron de distribución que el de la nucleoproteína viral N del RHBV Universidad de Costa Rica 2004-09-01 info:eu-repo/semantics/article info:eu-repo/semantics/publishedVersion Article application/pdf https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/rbt/article/view/15413 Revista de Biología Tropical; Vol. 52 No. 3 (2004): Volume 52 - Regular number 3 - September 2004; 765–775 Revista de Biología Tropical; Vol. 52 Núm. 3 (2004): Volumen 52 - Número regular 3 - Setiembre 2004; 765–775 Revista Biología Tropical; Vol. 52 N.º 3 (2004): Volume 52 - Regular number 3 - September 2004; 765–775 2215-2075 0034-7744 10.15517/rbt.v1i2 eng https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/rbt/article/view/15413/14778 Copyright (c) 2004 Revista de Biología Tropical http://creativecommons.org/licenses/by/4.0 |
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Universidad de Costa Rica |
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Revista de Biología Tropical |
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Muñoz, Miguel Bolaños, Isela Arrieta-Espinoza, Griselda Espinoza, Ana M |
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