Aislamiento de ADN de alta calidad en Psidium guajava L. para estudios genómicos

Introducción. La guayaba es uno de los principales frutales de la familia Myrtaceae por su alto valor nutricional. Es originario de América tropical y los principales países productores son: México, India, Brasil y Tailandia. El interés generado en los últimos años por el mejoramiento genético de es...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autores principales:	Sánchez, Elodia, Mora Newcomer, Eric, Barrantes Santamaría, Walter
Formato:	Online
Idioma:	spa eng
Publicado:	Universidad de Costa Rica 2021
Acceso en línea:	https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/agromeso/article/view/41606

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description	Introducción. La guayaba es uno de los principales frutales de la familia Myrtaceae por su alto valor nutricional. Es originario de América tropical y los principales países productores son: México, India, Brasil y Tailandia. El interés generado en los últimos años por el mejoramiento genético de este cultivo, ha propiciado el empleo de herramientas moleculares que permitan determinar la variabilidad genética y seleccionar genes de interés agronómico de una forma rápida y confiable. Sin embargo, el aislamiento de ADN de alta pureza es un requisito previo para poder emplear las técnicas moleculares de última generación. Objetivo. Aislar ADN genómico (ADNg) de alta calidad de guayaba, en cantidad e integridad adecuados. Materiales y métodos. El experimento se realizó en el Laboratorio de Biología Molecular de la Estación Experimental Agrícola Fabio Baudrit Moreno, entre enero y diciembre del 2019. Se compararon tres métodos diferentes para aislar ADN: Promega (ReliaPrep™ gDNA Tissue Miniprep Kit), Qiagen (DNeasy Plant Mini Kit) y CTAB (Doyle y Doyle, 1990) con modificaciones. Para la extracción de ANDg se utilizó material fresco y liofilizado de hojas jóvenes de guayaba (Psidium guajava L.; 2n = 22). Para determinar el mejor método se midieron la calidad, cantidad e integridad del ADNg de cada uno. Resultados. Se logró obtener ADNg con los tres métodos evaluados, los mejores resultados en cantidad de ADNg (ng μl-1) se obtuvieron con el material liofilizado y con el método CTAB. Los métodos CTAB y Qiagen mostraron mayor grado de pureza (relaciones A260/280 con valores óptimos) en comparación con el método Promega. Conclusión. Se logró obtener ADNg en cantidad, calidad e integridad adecuada. Esto se logró con base en extracciones en tejido liofilizado de hojas jóvenes y con el método de extracción del kit de Qiagen.
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However, the isolation of high-purity DNA is a prerequisite for the use of state-of-the-art molecular techniques for genetic analysis. Objective.  Isolate high-quality genomic DNA (gDNA) from guava, in adequate quantity and integrity. Materials and methods. The experiment was carried out in the Molecular Biology Laboratory of the Estacion Experimental Agricola Fabio Baudrit Moreno, between January and December 2019. Three different methods for isolating DNA were compared: Promega (ReliaPrep™ gDNA Tissue Miniprep Kit), Qiagen (DNeasy Plant Mini Kit), and CTAB (Doyle and Doyle, 1990) with modifications. For the gDNA extraction, fresh and lyophilized of young leaves of guava (Psidium guajava L; 2n = 22) were used. To determine the best method, the quality, quantity, and integrity of the gDNA were measured for each method. Results. The gDNA was obtained with the three evaluated methods. The best results in terms of gDNA quantity (ng μl-1) were obtained with the lyophilized material and with the CTAB method (Doyle and Doyle). The CTAB (Doyle and Doyle) and Qiagen methods showed a higher degree of purity (A260 / 280 ratios with optimal values) compared to the Promega method. Conclusion. The gDNA was obtained in adequate quantity, quality, and integrity. This was achieved based on extractions in lyophilized young leaf tissue and with the extraction method of the Qiagen kit. Introducción. La guayaba es uno de los principales frutales de la familia Myrtaceae por su alto valor nutricional. Es originario de América tropical y los principales países productores son: México, India, Brasil y Tailandia. El interés generado en los últimos años por el mejoramiento genético de este cultivo, ha propiciado el empleo de herramientas moleculares que permitan determinar la variabilidad genética y seleccionar genes de interés agronómico de una forma rápida y confiable. Sin embargo, el aislamiento de ADN de alta pureza es un requisito previo para poder emplear las técnicas moleculares de última generación. Objetivo. Aislar ADN genómico (ADNg) de alta calidad de guayaba, en cantidad e integridad adecuados. Materiales y métodos. El experimento se realizó en el Laboratorio de Biología Molecular de la Estación Experimental Agrícola Fabio Baudrit Moreno, entre enero y diciembre del 2019. Se compararon tres métodos diferentes para aislar ADN: Promega (ReliaPrep™ gDNA Tissue Miniprep Kit), Qiagen (DNeasy Plant Mini Kit) y CTAB (Doyle y Doyle, 1990) con modificaciones. Para la extracción de ANDg se utilizó material fresco y liofilizado de hojas jóvenes de guayaba (Psidium guajava L.; 2n = 22). Para determinar el mejor método se midieron la calidad, cantidad e integridad del ADNg de cada uno. Resultados. Se logró obtener ADNg con los tres métodos evaluados, los mejores resultados en cantidad de ADNg (ng μl-1) se obtuvieron con el material liofilizado y con el método CTAB. Los métodos CTAB y Qiagen mostraron mayor grado de pureza (relaciones A260/280 con valores óptimos) en comparación con el método Promega. Conclusión. Se logró obtener ADNg en cantidad, calidad e integridad adecuada. Esto se logró con base en extracciones en tejido liofilizado de hojas jóvenes y con el método de extracción del kit de Qiagen. Universidad de Costa Rica 2021-05-01 info:eu-repo/semantics/article info:eu-repo/semantics/publishedVersion Article texto text/xml text/html application/pdf application/epub+zip audio/mpeg audio/mpeg https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/agromeso/article/view/41606 10.15517/am.v32i2.41606 Agronomía Mesoamericana; 2021: Agronomía Mesoamericana: Vol. 32, Issue 2 (May-August); 638-649 Agronomía Mesoamericana; 2021: Agronomía Mesoamericana: Vol. 32, Nº 2 (mayo-agosto); 638-649 Agronomía Mesoamericana; 2021: Agronomía Mesoamericana: Vol. 32, Issue 2 (May-August); 638-649 2215-3608 1021-7444 spa eng https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/agromeso/article/view/41606/46741 https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/agromeso/article/view/41606/46515 https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/agromeso/article/view/41606/46455 https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/agromeso/article/view/41606/46457 https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/agromeso/article/view/41606/46459 https://revistas.ucr.ac.cr/index.php/agromeso/article/view/41606/46460 Copyright (c) 2021 Walter Barrantes Santamaría

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