Optimización de técnicas de PCR para la detección de Salmonella enterica (serotipo Gallinarum) en aves de corral de Costa Rica

Optimización de técnicas de PCR para la detección de Salmonella enterica (serotipo Gallinarum) en aves de corral de Costa Rica

Introducción: La tifosis aviar y la pulorosis, enfermedades ocasionadas por Salmonella enterica subsp. enterica (serotipo Gallinarum, biotipos Gallinarum y Pullorum), son responsables de una elevada mortalidad en aves de corral y generan grandes pérdidas económicas. Objetivo: Optimizar técnicas mole...

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Main Authors: Leza-Leza, Makayla Tatiana, Víquez-Ruiz, Eunice, Barquero-Calvo, Elías, Sancho-Blanco, Carolina, Umaña-Castro, Rodolfo
Format: Online
Language:spa
Published: Universidad Estatal a Distancia, Costa Rica 2022
Online Access:https://revistas.uned.ac.cr/index.php/cuadernos/article/view/3831
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spelling CUADERNOS38312023-09-11T21:52:39Z Optimization of PCR techniques optimization for detection of Salmonella enterica (serotype: Gallinarum) in Costa Rican poultry Optimización de técnicas de PCR para la detección de Salmonella enterica (serotipo Gallinarum) en aves de corral de Costa Rica Leza-Leza, Makayla Tatiana Víquez-Ruiz, Eunice Barquero-Calvo, Elías Sancho-Blanco, Carolina Umaña-Castro, Rodolfo molecular detection, DNA, taxonomic placement, Enterobacteriaceae Palabras clave: detección molecular, ADN, posicionamiento taxonómico, Enterobacteriaceae. Introduction: Avian typhoid and pullorosis, diseases caused by Salmonella enterica subsp. enterica (Gallinarum serotype, Gallinarum and Pullorum biotypes), cause high mortality in poultry and generate large economic losses. Objective: To optimize molecular techniques, such as endpoint PCR and real-time PCR (qPCR), to detect avian typhoid and pullorosis. Methods: We used control bacterial strains, isolates and tissues from birds infected with Salmonella Gallinarum to standardize detection with both techniques. Results: For the endpoint PCR, we obtained 100% repeatability, specificity and sensitivity, and a Kappa value of 0.98 for reproducibility; for qPCR, 103% efficiency with a variation under 6% in repeatability and reproducibility. The detection limit for genomic DNA was 6.4 pg/μL and the limit for the number of viable cells was 3x102 CFU/mL for endpoint PCR, and 10 DNA copies per reaction for qPCR. We also confirmed the identity of S. Gallinarum, and was reduced. We reduced the detection time to about 48 hours. Conclusion: We optimized a molecular technique for rapid, reliable and sensitive detection of Salmonella Gallinarum/Pullorum, which reduces the waiting time to take action in cases of clinical suspicion and possible outbreaks. Introducción: La tifosis aviar y la pulorosis, enfermedades ocasionadas por Salmonella enterica subsp. enterica (serotipo Gallinarum, biotipos Gallinarum y Pullorum), son responsables de una elevada mortalidad en aves de corral y generan grandes pérdidas económicas. Objetivo: Optimizar técnicas moleculares, como la PCR punto final y la PCR de tiempo real (qPCR), para detectar tifosis aviar y pulorosis. Métodos: Se emplearon cepas bacterianas control, aislamientos y tejidos de aves de infectadas con Salmonella Gallinarum para estandarizar la detección con ambas técnicas. Resultados: Para la PCR de punto final se obtuvo una repetibilidad, especificidad y sensibilidad del 100%, y un valor Kappa de 0,98 para la reproducibilidad; para qPCR una eficiencia del 103% y variación menor al 6% en repetibilidad y reproducibilidad. El límite de detección de ADN genómico fue de 6,4 pg/μL y el del número de células viables de 3x102 UFC/mL para la PCR punto final, y de 10 copias de ADN por reacción para la qPCR. Confirmamos la identidad de S. Gallinarum. Y se redujo el tiempo de detección a unas 48 horas, Conclusión: Logramos optimizar una técnica molecular para detección rápida, confiable y sensible de Salmonella Gallinarum/Pullorum, la cual reduce el tiempo de espera para tomar acción en casos de sospecha clínica y posibles brotes. Universidad Estatal a Distancia, Costa Rica 2022-05-31 info:eu-repo/semantics/article info:eu-repo/semantics/publishedVersion application/pdf text/html application/epub+zip https://revistas.uned.ac.cr/index.php/cuadernos/article/view/3831 10.22458/urj.v14i1.3831 UNED Research Journal; Vol. 14 No. 1 (2022); e3831 UNED Research Journal; Vol. 14 Núm. 1 (2022); e3831 1659-441X 1659-4266 spa https://revistas.uned.ac.cr/index.php/cuadernos/article/view/3831/5603 https://revistas.uned.ac.cr/index.php/cuadernos/article/view/3831/6918 https://revistas.uned.ac.cr/index.php/cuadernos/article/view/3831/5605 Copyright (c) 2022 UNED Research Journal https://creativecommons.org/licenses/by/4.0
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